Порядок проведения тестирования
Тестирование для подтверждения наличия IgG-антител называется ELISA (Иммуноферментный анализ, сокращенно ИФА, англ. enzyme-linked immunosorbent assay). Это надежный иммунологический метод, применяемый и для определения других антител.
В нашем случае антиген — богатый протеином экстракт продукта питания, находящийся в каверне, подсоединяется к тестовой пробирке из пластика. Каждый продукт помещается в отдельную лунку. Из практических соображений используют так называемые микротитровальные пластиковые планшеты с 96 лунками. В 5 лунках, предназначеных для стандартного сравнения, находятся калибровочные растворы, с помощью которых может быть определена концентрация IgG. Определенное количество предварительно обработанной и разбавленной сыворотки крови пациента добавляется во все лунки, содержащие экстракты продуктов питания.
Если в крови пациента содержатся антитела против продуктов питания, они прикрепляются к тем продуктам питания, против которых они направлены. По истечении инкубационного времени (время между контактом и реакцией) планшеты промываются, и жидкость, находящаяся в них, удаляется. В лунках остаются прикрепленные к ним антитела. Затем добавляют второе антитело, в этот раз в каждую лунку со стандартным раствором. Оно способно распознавать только IgG-антитела человека, прикрепляясь только к IgG, соединенные с продуктами питания, и к стандартному раствору. Непомеченные продукты питания в этот раз уже не используются, а исследуемое антитело маркируется энзимом. По истечении определенного времени снова удаляют жидкость и моют планшеты. В конечном итоге остается лишь комплекс из продуктов, IgG-антител крови и маркированных IgG-антител в лунках.
Чтобы сделать эти комплексы видимыми, примешивают особый индикатор, реагирующий с энзимами маркированного антитела, которое под действием этого индикатора меняет цвет. Интенсивность цвета пропорциональна количеству образованного комплекса, который в свою очередь пропорционален содержащемуся в крови количеству IgG против соответствующих продуктов питания. С помощью калибровочной кривой можно высчитать точную концентрацию каждого специфического IgG. Посредством добавления стоп-раствора реакция останавливается и стабилизируется. В заключение содержимое планшеты измеряется с помощью разработанного специально для этой цели лазерного прибора.
Для проведения теста ImuPro300 используются 3 планшеты на каждого пациента, что соответствует 1152 каплям из пипетки. Так, в течение дня один техник-лаборант способен произвести только 20 проб.
При стандартном ImuPro— тесте разработана методика на проверку 273 продуктов питания.
